生物样本分析主要考虑的问题包括浓度低、干扰多、取样少、个体差异大、应视样品类型、目标分析物的性质选择合适的的样品处理方法。
生物样本预处理方法有:
- 蛋白沉淀法(PPT)
- 液液萃取法(LLE)
- 固相萃取法(SPE)
- 其他预处理方法:超滤膜过滤、稀释、柱切换、衍生化、免疫亲和萃取(IAC)、酸或者酶水解;
一、蛋白沉淀法(PPT)
蛋白沉淀法(PPT)通过加入有机试剂、酸碱性试剂、中性盐和酶等蛋白沉淀剂,使蛋白质变性、达到除杂效果。
优点:具有操作简单、便捷、经济等特点。
缺点:大量样品导致多次操作,耗时长,效率低,而且蛋白沉淀后的样品净化程度较低,导致基质效应,目标物响应低。
适用范围:适合样品量少的极性小分子化合物。
二、液液萃取法(LLE)
液液萃取法(LLE)采用与水互不相溶的有机溶剂,将目标物从水相提取至有机相的方法。
优点:液液萃取法(LLE)适合非极性至中等极性的分析物,具有富集浓缩效果,减少基质效应,成本低,方法易转移,已开发。
缺点:不适用于亲水极性物质,操作中易污染,耗时较长。
适用范围:需要根据分析物性质,考虑有机溶剂特性、体积、pH对提取效果影响;宜选择对分析物溶解度大、沸点低、易浓缩、与水不互溶、无毒、稳定、不易乳化的溶剂。
三、固相萃取法(SPE)
SPE利用小柱不同填料类型,实现正相、反相、离子交换等等不同的分离模式,选择性的保留分析物而使干扰物流出,或反之,达到净化目的。
优点:适用的生物样本范围广,可富集痕量样本分析。
缺点:操作繁琐,耗时长,成本高,需要丰富的操作技巧。
适用范围:适用于从极性到非极性生物样本多种类型的生物样本,可富集痕量样本分析。
针对目前固相萃取法的普遍缺点,莱奥提出了96孔正压固相萃取&氮吹浓缩解决方案。
96孔正压固相萃取仪可支持蛋白沉淀板(PPT)、液液萃取板(LLE)、固相萃取板(SPE),可同时操作96/48/24个样本,简化操作步骤,大大缩短萃取时间,它可通过气动控制,针对血液等粘稠样本,轻松过柱,保障很好的平行性和回收率,排除因人为操作误差而导致结果不准确。
固相萃取后需要氮吹的样本,可选配莱奥96孔氮吹浓缩仪,同样可支持各种规格的96/48/24位深孔板,色谱瓶和EP管。
生物样本在氮吹的过程,莱奥氮气发生器全程为氮吹仪提供氮气。
四、其他预处理办法:
如稀释法,样品经一定体积的稀释液稀释后直接进样。
优点:操作简单,耗时少,成本低。
缺点:不适用浓度低的样本,基质效果明显。
使用范围:适用尿液、泪液、脑脊液等比较干净样本。